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关于高速冷冻离心机的分离方法

发布时间:2015-01-29        [字体:    ]        浏览次数:88
  离心的时间要选择得当,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。对于得到的沉淀和上清液可以进行进一步的离心,直到达到所需要的分离纯度为止。高速冷冻离心机的分离方法是怎样的?通常在第一次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到的上清液以更高速度离心,把所需的粒子沉积下来

  差速离心的特点是操作简单,但分离纯度不高。

  密度梯度离心法:可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率。

  (1)高速冷冻离心机速率区带法(ratezonal):

  根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步骤如下:

  在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐渐增加(正梯度)。

  将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的顶部。样品在梯度溶液表面形成一负梯度。

  由于不同大小的粒子在离心力作用下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会形成几条分开的样品区带。

  (2)等密度离心法(isopycnic):

  根据粒子的不同密度来分离。离心过程中,粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带。

  密度样度的选择要使梯度的范围包括所有待分离粒子的密度。样品可以在密度梯度液粒上面或均匀分布在密度梯度中。经离心后,样品粒子达到它们的平衡点。

  注意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度。离心过程必须在区带到达管子底部前停止。

  注意:平衡后粒子的分离完全由其密度决定,与时间无关,此时再改变离心转速,只能改变区带的相对位置。
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